紫外可見分光光度計(jì)的機(jī)理：

盡管我們可以通過感知物質(zhì)的顏色來(lái)預(yù)測(cè)總的吸收波長(zhǎng)，但無(wú)法進(jìn)行*的波長(zhǎng)分析，而且還可能存在著個(gè)體差異，另外人眼也無(wú)法觀測(cè)到紫外線區(qū)。而在紫外可見分光光度計(jì)的系統(tǒng)中不存在個(gè)體的差異，原因是在分光光度計(jì)中使用人造光源來(lái)代替白光，光不是直接照射在物體上的，而是通過棱鏡或衍射光柵將白光分成許多顏色，然后每種顏色（單色光）分別掃描物體來(lái)測(cè)量物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)。

紫外可見分光光度計(jì)的基本構(gòu)造：

分光光度計(jì)主要由光源、單色器（分光鏡）、吸收池、檢測(cè)器和顯示器五大部分組成。

光源：在整個(gè)紫外光區(qū)或可見光區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命，可見光區(qū)常用的光源是鎢燈或碘鎢燈，波長(zhǎng)范圍是350-1000nm。在紫外區(qū)常為氫燈或氘燈，發(fā)射的連續(xù)波長(zhǎng)范圍是180-360nm。

單色器：是將光源輻射的復(fù)合光分成單色光的光學(xué)裝置。它是分光光度計(jì)的心臟部分。單色器一般由狹縫、色散元件及透鏡系統(tǒng)組成。關(guān)鍵是色散元件，*常見的色散元件是棱鏡和光柵。

?狹縫：將單色器的散射光切割成單色光。直接關(guān)系到儀器的分辨率。狹縫越小，光的單色性越好。分為入射狹縫和出射狹縫。

?棱鏡：175-2700nm的光能被分開，色散隨波長(zhǎng)變化，波長(zhǎng)長(zhǎng)色散差，材質(zhì)主要有水晶和溶凝石英。

?光柵：色散在整個(gè)波長(zhǎng)范圍內(nèi)是統(tǒng)一的。1個(gè)衍射光柵能獲得寬波長(zhǎng)。另外，用常量狹縫寬度能獲得常量光譜。因此具有波長(zhǎng)范圍寬，色散均勻，分辨性能好，使用方便的優(yōu)點(diǎn)。

樣品池：用于盛裝試液的裝置。吸收材料必須能夠透過所測(cè)光譜范圍的光。一般可見光區(qū)使用玻璃吸收池，紫外光區(qū)使用較貴的石英吸收池。測(cè)量時(shí)要挑選配對(duì)，因?yàn)槲粘夭牧系谋旧砦馓匦砸约拔粘氐墓獬涕L(zhǎng)度的精度等參數(shù)對(duì)分析結(jié)果都有影響。

檢測(cè)器：用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電管、光電倍增管、光電二極管、光電攝像管等。它的作用是充當(dāng)在紫外和可見區(qū)有靈敏性的光電管和放大器的作用。要求靈敏度高、響應(yīng)時(shí)間短、噪聲水平低、穩(wěn)定性好等性質(zhì)。

顯示器：將檢測(cè)到的信號(hào)輸出顯示出來(lái)，能直觀的對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀看分析。

分光光度計(jì)的分類：

一般有可見分光光度計(jì)，紫外分光光度計(jì)，可見紫外分光光度計(jì)，紅外分光光度計(jì)等。按儀器使用的光學(xué)系統(tǒng)還分為單光束、雙光束、多波長(zhǎng)光度計(jì)等。

單光束：經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測(cè)定。這種光度計(jì)的特點(diǎn)是簡(jiǎn)單便宜適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。

雙光束：經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過參比池，一束通過樣品池。光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長(zhǎng)的函數(shù)記錄下來(lái)。一般具備快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。此種儀器操作復(fù)雜價(jià)格較高。

雙波長(zhǎng)：由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長(zhǎng)的單色光；通過折波器以一定的頻率交替通過同一樣品池，然后由檢測(cè)器交替接收信號(hào)，*后由顯示器顯示出兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度差值從而扣除了背景吸收的吸光度，達(dá)到更*的測(cè)量效果。